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cy染料小動(dòng)物活體成像操作流程
2017-04-13 吲哚花菁綠(ICG，indocyaninegreen)是經(jīng)過FDA認(rèn)證的菁染料，出于安全考慮，后期應(yīng)用于活體（人、動(dòng)物、細(xì)胞）的染料在結(jié)構(gòu)上都和ICG有相似或相近之處。cy系列染料是Amersham公司（目前為GE公司）zui初開發(fā)的染料體系，它的橋環(huán)由苯并吲哚變?yōu)檫胚岘h(huán)，并在吲哚的苯環(huán)上對(duì)稱地引入硫酸根基團(tuán)，水溶性得到很大改善，分子量降低后對(duì)大分子的親和力有所增加。cy系列菁染料多帶有羥基琥珀酰亞胺活性酯(NHSester)、異硫氰酸酯(NCS)等活性基團(tuán)，可與蛋白質(zhì)、多肽...
不接觸染料也能進(jìn)行DNA電泳的分析
2017-02-24 問：您是否為EB有毒，安全染料貴的問題而煩惱？答：試試?yán)钣浬锏腄NA電泳套裝吧!圖1：I、Hela細(xì)胞與EB,李記套裝的上樣buffer及李記GelRed在室溫下孵育一小時(shí)，用Olympus熒光顯微鏡觀察并拍照，與EB孵育的細(xì)胞顯示出綠色熒光，表明染料已透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞并與核酸結(jié)合。李記套裝的上樣buffer及李記GelRed未顯示熒光，說明李記染料未能透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞。II、EB,李記套裝的上樣buffer及李記GelRed染料相同DNA濃度下染色效果。李記生物的DN...
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
2016-11-29 細(xì)胞凍存過程對(duì)保持細(xì)胞狀態(tài)影響巨大，李記生物結(jié)合多年實(shí)踐，總結(jié)出如下實(shí)用的細(xì)胞凍存流程?！奥齼隹烊凇笔羌?xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則，這對(duì)zui大限度的保存細(xì)胞活力至關(guān)重要。目前細(xì)胞凍存多用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作為保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性；細(xì)胞凍存和復(fù)蘇時(shí)，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶產(chǎn)生是關(guān)鍵。緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的物理?yè)p傷。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲...
高分辨率熔解曲線（HRM）分析指南
2016-10-10 HRM(HighResolutionMeltinganalysis，高分辨熔解曲線)同許多熒光PCR技術(shù)一樣，是利用特定dsDNA染料可以插入DNA雙鏈小溝中（PCR產(chǎn)物）的特性，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過程中dsDNA解鏈，熒光染料脫落，熒光信號(hào)減弱或消失的過程，高分辨記錄熔解曲線，從而對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。HRM技術(shù)利用dsDNA的物理性質(zhì)，準(zhǔn)確反映DNA序列堿基配對(duì)特異性與解鏈溫度變化的情況，無需使用特異性標(biāo)記探針，不受突變種類和突變位點(diǎn)的限制，具有高靈敏度和特異性、高通量、操作簡(jiǎn)單...
培養(yǎng)細(xì)胞如何選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的血清？快點(diǎn)擊進(jìn)來看看吧！
2016-09-02 培養(yǎng)細(xì)胞如何選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的血清？快點(diǎn)擊進(jìn)來看看吧！血清（Serum）即血液凝固析出的淡黃色透明液體將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，血清中無纖維蛋白原，這一點(diǎn)是與血漿zui大的區(qū)別。在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)...
細(xì)胞骨架的熒光探針標(biāo)記方法
2016-08-11 細(xì)胞骨架主要有微管(micmtuble,MT)，微絲(microfilament,MF)，中間絲(intermediatefilament,IF三種類型。它們分別由不同的蛋白單體組裝而成，其中微管蛋白(tubulin)、肌動(dòng)蛋白(actin)、波形蛋白(vimentin)等是細(xì)胞骨架的重要組成部分，也是zui常被研究的細(xì)胞骨架蛋白。1963年.Slauterback采用戊二醛常溫固定方法.首先使用電鏡在水螅刺細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了微管。隨后，微絲和中間絲相繼被發(fā)現(xiàn)。它們廣泛存在于真核細(xì)...
細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染來源/檢測(cè)/預(yù)防/去除
2016-07-18 細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染來源/檢測(cè)/預(yù)防/去除一、細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染來源及主要支原體種類支原體（Mycoplasma）是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間（0.1-0.6μm），沒有細(xì)胞壁、并獨(dú)立生活原核生物，形態(tài)呈高度多形性，呈圓形、絲狀或梨形。由于支原體直徑較小，進(jìn)行除菌過濾是，約1%的支原體可以直接穿過常規(guī)的0.22μm的微孔除菌濾膜，造成細(xì)胞的支原體污染。支原體污染的來源包括：（1）工作環(huán)境的污染，實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染；（2）操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）；（3）已受...

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