Quick Cell支原體去除/預(yù)防試劑盒

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產(chǎn)品簡介

支原體（Mycoplasma）是一種沒有細胞壁的原核生物，大小約0.1 - 0.6微米。目前，已發(fā)現(xiàn)的支原體品種有100多種。 由于支原體直徑較小，經(jīng)?？梢源┻^實驗室常規(guī)的0.20微米孔徑的除菌濾膜，高壓過濾時，甚至可以穿過0.10微米孔徑的除菌濾膜，造成細胞的支原體污染。本公司開發(fā)的支原體清除試劑Ⅰ含有抑制支原體蛋白質(zhì)合成的藥物，而支原體清除試劑Ⅱ含有抑制支原體DNA合成的藥物。由于兩種試劑的作用機理不同，支原體清除試劑Ⅰ需要處理不少于15天，而支原體清除試劑Ⅱ只需處理7天。兩者都可以達到*殺滅和清除支原體的目的。大約5-10%的支原體會對Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ或Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ產(chǎn)生抗性，此外，也有3-5%左右的細胞會在殺滅支原體的過程中死亡，由于上述兩個原因，我們一般建議同時購買兩種支原體清除試劑，如果發(fā)現(xiàn)細胞被污染，可以將細胞分成兩份，分別用Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ同時進行殺滅，這樣支原體對兩種藥物同時產(chǎn)生抗性和處理過程中細胞同時死亡的概率會非常低。

試劑盒組成

       Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ              1.0 mL (1000×)

       Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ              1.0 mL (1000×)

運輸和儲存

      常溫運輸，-20 ℃保存，可以保存2年。

使用方法

（一）Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ

1. 使用之前，先將Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ用PBS或者無血清培養(yǎng)液稀釋10倍后，放4℃冰箱保存。

2. 將50-100萬個細胞鋪到60 mm的細胞培養(yǎng)皿內(nèi)，加入4 mL含Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ的正常細胞培養(yǎng)液（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ，按1:100比例加入）。

3. 每2-3天更換細胞培養(yǎng)液，加入新鮮的含Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ的正常細胞培養(yǎng)液。期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要胰酶消化），并更換新的培養(yǎng)皿。

4. 處理15天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅*。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天。

5. 以后每隔1個月進行支原體的常規(guī)檢測，以保證沒有新的支原體污染。

（二）Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ

1. 使用之前，先將Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ（注意：支原體清除試劑Ⅱ在-20 ℃保存后，解凍時可能會有細小的結(jié)晶析出）用PBS或者無血清培養(yǎng)液稀釋10倍后，（支原體清除試劑Ⅱ可以*溶解，放4℃冰箱保存。

2. 將50-100萬個細胞鋪到60 mm的細胞培養(yǎng)皿內(nèi)，加入4 mL含Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ的正常細胞培養(yǎng)液（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ，按1:100比例加入）。

3. 每天更換細胞培養(yǎng)液，加入新鮮的含Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ的正常細胞培養(yǎng)液。期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要胰酶消化），并更換新的培養(yǎng)皿。

4. 處理7天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅*。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理3天。

5. 以后每隔1個月進行支原體的常規(guī)檢測，以保證沒有新的支原體污染。

注意事項

      1. 建議將細胞分成兩份，分別用Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ同時進行殺滅，這樣支原體對兩種藥物同時產(chǎn)生抗性和處理過程中細胞同時死亡的概率會非常低。如果單獨使用一種清除試劑的話，萬一發(fā)現(xiàn)細胞對其中一種清除試劑有抗性或者細胞在處理過程中死亡，又要再花7-15天的時間嘗試另外一種清除試劑的效果。

      2. 處理過程中，注意每天觀察細胞的狀況，如果發(fā)現(xiàn)支原體清除試劑對細胞的毒性較大，可以加大培養(yǎng)液中的血清濃度或者提高細胞的密度。

      3. Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ在降低濃度后（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體支原體清除試劑Ⅰ或者Ⅱ，按1:500比例加入）也可以加入到培養(yǎng)液中作為短期（1-2個月）的支原體污染預(yù)防藥物，但是不建議在細胞培養(yǎng)液中長期（超過2個月）加入，因為有可能導(dǎo)致對該兩種藥物有抗性的支原體出現(xiàn)。

Quick Cell支原體清除試劑的效果圖：左側(cè)為未經(jīng)支原體清除試劑處理的人Hela細胞,經(jīng)DAPI染色后，除了細胞核為藍色外，細胞質(zhì)也有大量的絮狀核酸物質(zhì)被染成藍色，這些處于細胞質(zhì)的核酸物質(zhì)就是支原體DNA。而右側(cè)為經(jīng)過本公司的支原體清除試劑Ⅱ處理7天的Hela細胞，經(jīng)DAPI染色后，除了細胞核為藍色外，細胞質(zhì)沒有任何絮狀核酸物質(zhì)被染成藍色，說明支原體已經(jīng)被清除。

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