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揭開高保真DNA聚合酶的神秘面紗

更新時間:2018-06-22點擊次數(shù):1900
  高保真DNA聚合酶*的擴增能力,簡單模板可擴增20 kb,復(fù)雜模板可輕松擴增10 kb。*的靈敏度,模板親和力強,極微量的模板也可擴增。風(fēng)一樣的擴增速度:延伸時間極短,擴增速度可達(dá)15 sec/kb。廣泛的模板適應(yīng)性:適用于基因組DNA和cDNA等復(fù)雜模板的擴增。通過定向改造,擁有高保真的特性,可以擴增長達(dá)15Kb的DNA片段,適用于超長序列的擴增,同時具有高靈敏度、高產(chǎn)量的優(yōu)勢。通過“直接進化”技術(shù),定向改造了種類十分豐富的適用于多種不同實驗?zāi)康牡纳锩福饔刑攸c,可以滿足不同的客戶需求,且Kapa的系列產(chǎn)品可以適用于市場上現(xiàn)有的各類PCR/Real-time PCR儀器。
 
  高保真DNA聚合酶的不同點,作用底物不同,高保真DNA聚合酶底物是NTP高保真DNA聚合酶作用不需要引物,而DNA聚合酶作用需要引物。高保真DNA聚合酶本身具有一定的解旋功能,而DNA聚合酶沒有,當(dāng)需要解開雙鏈的時候要解旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶的幫助。具有5‘到3’端的聚合酶活性,而DNA聚合酶不僅有5‘到3’端的聚合酶活性,還具有3‘到5’端的外切酶活性。保證DNA復(fù)制時候校對,所以復(fù)制的忠實性高于轉(zhuǎn)錄的??赡苁姑傅臉?gòu)象發(fā)生變化,促進3'-OH與5'-PO4結(jié)合生成磷酸二酯鍵。若是錯誤的核苷酸進入結(jié)合位點,則不能與模板配對,無法改變酶的構(gòu)象而被3'-5'外切酶活性位點所識別并切除之。
 
  高保真DNA聚合酶在PCR中扮演中至關(guān)重要的作用,從某種意義來講PCR技術(shù)就是耐熱聚合酶的技術(shù)。生物醫(yī)藥領(lǐng)域所使用的大部分是野生型的DNA 聚合酶,如大家熟悉的Taq DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶等天然形式存在的酶。因為酶分子自身的結(jié)構(gòu)和功能都有限制,隨著研究人員實驗要求的提升和生物樣本復(fù)雜性的提高,野生型DNA聚合酶的局限性也逐漸凸顯出來,如擴增效率低,特異性差,高AT或GC含量樣本擴增結(jié)果差,樣本中或PCR 系統(tǒng)中有些抑制劑對反應(yīng)有干擾等等。

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